心肌酶譜
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對(duì)心肌酶檢查，檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死或細(xì)胞膜通透性。
1.血清酶總論：P232
LDH、AST、CK及其同I酶，α-HBD
目錄 |
一、血清酶的來(lái)源和分類(lèi)：
（一）根據(jù)來(lái)源及血漿中發(fā)揮作用：
1.血漿持異酶：主要在血漿中發(fā)揮催化作用的酶類(lèi)
eg：凝血酶原，凝血因子（X、ⅫI、Ⅶ）纖溶酶原，前激肽釋放酶
銅藍(lán)蛋白：是一種氧化酶，與Fe蛋白，動(dòng)員有關(guān)
脂蛋白脂肪酶：參與脂蛋白中脂肪的水解和儲(chǔ)存
2.外分泌酶
eg：唾液和胰淀粉酶，胰脂肪酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。
在血漿中很少發(fā)揮催化作用
其濃度與其分泌腺體的功能有關(guān)
3.細(xì)胞酶：存在于各細(xì)胞和組織中進(jìn)行物質(zhì)代謝的酶類(lèi)
在血液中無(wú)重要的催化作用
（1）一般代謝酶：無(wú)器官特異性
（2）組織專(zhuān)一性酶：OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能較特異地反映肝cell的病變。
（二）根據(jù)酶促反應(yīng)性質(zhì)可將酶分為六類(lèi)：
1.氧化還原酶類(lèi)：催化底物進(jìn)行氧化還原反應(yīng)。eg:LDH
CHO CHO
C=0＋NADH＋H+ LDH CH－OH＋NAD+
COOH COOH
eg：LDH琥珀酸脫氫酶，細(xì)胞色素氧化酶，過(guò)氧化物酶
2.轉(zhuǎn)移酶類(lèi)：催化底物之間進(jìn)行某些基團(tuán)的轉(zhuǎn)移或交換的酶類(lèi)
COOH CH3 COOH CH3
（CH2）2 ＋HC－NH2 ALT （CH2）2 ＋ C＝0
C＝0 COOH HC－NH2 COOH
COOH COOH
eg：轉(zhuǎn)氨酶、已糖激酶、磷酸化酶
3.水解酶：催化底物之間發(fā)生水解反應(yīng)的酶類(lèi)
ALP
水解
4.裂解酶類(lèi)：催化底物移去一個(gè)基因而留下雙鍵的反應(yīng)或逆反應(yīng)的酶類(lèi)。
5.異構(gòu)酶類(lèi)：催化各種同分異構(gòu)體之間互相轉(zhuǎn)化的酶類(lèi)
磷酸已糖激酶
6.合成酶類(lèi)（連接酶類(lèi)）：催化兩分子底物合成－分子的化合物，同時(shí)必須偶聯(lián)有ATP磷酸鍵斷裂。
二、血清酶的命名：
1.習(xí)慣命名法：根據(jù)酶來(lái)源，催化反應(yīng)性質(zhì)及底物來(lái)命名。
底物：淀粉酶，蛋白酶
性質(zhì)：脫氫酶、轉(zhuǎn)移酶
來(lái)源：胰淀粉酶、胃蛋白酶
底物＋性質(zhì)：谷草轉(zhuǎn)氨酶
2.系統(tǒng)命名法：酶反應(yīng)底物、性質(zhì)均要列出，各底物間以“：”隔開(kāi)
編號(hào)：（1）1為氧化還原酶類(lèi)
2為轉(zhuǎn)移酶類(lèi)
3為水解酶類(lèi)
4為裂解酶
（2）反應(yīng)作用的位置，即可用于哪個(gè)基因
1.1 －CH－OH
1.2 －C＝0
1.3 －C＝CH
1.4 －C＝NH
1.5 －CH－NH2
1.6 NADH、NADPH
（3）
1.1.1 氯化還原酶 CH－OH 受體：NAD+ NADP-
1.1.2 氯化還原酶 CH－OH 受體：細(xì)胞色素
1.1.3 氯化還原酶 CH－OH 受體：分子氧
三、血清酶的去路：
（一）血清酶的排泄：P234
2.膽汁不是血清酶排泄途徑
（二）肝或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)血清酶的清除：
（四）轉(zhuǎn)入其它體液
四、酶的活性單位及生理差異：
（一）酶的活性單位：在規(guī)定條件，每分鐘催化1umol的基質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)化所需要的酶量。
規(guī)定條件包括：溫度、PH、緩沖系統(tǒng)、基質(zhì)濃度及輔助因素
（二）酶的單位計(jì)算
1.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算：
（U/L）酶活力單位＝A樣品/A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×Vt/Vs×1/t×1000
總體積-樣品+基質(zhì)
2.根據(jù)反應(yīng)底物的消光系數(shù)：
酶活力＝A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光系數(shù) 比色杯厚度
（三）血清酶的生理差異：
1.性別：男＞女
2.年齡：兒童 磷酸酶＞成人 嬰兒 LDH 2倍成人
3.進(jìn)食：對(duì)酶活力本身無(wú)影響，但可影響比色時(shí)的濁度
4.活動(dòng)：
5.妊娠：ALT、LDH、ALP↑
五、疾病時(shí)血清酶改變的機(jī)制：
（一）合成異常：P238
1.合成減少
2.合成增加
（二）酶從損傷細(xì)胞中釋放增加：
是疾病時(shí)大多數(shù)血清酶↑的主要機(jī)制
（三）其它機(jī)制：
藥物，毒物可作為酶的抑制劑
2.AST的測(cè)定：
AST 谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）
天門(mén)冬氨酸氨基移換酶
一、AST分布：
廣泛分布于人體各組織、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最豐富。
主要存在線粒體中（M－AST）。胞漿中（C－AST）僅占12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述組織發(fā)生病變
時(shí)，才釋放入血。
方法學(xué)介紹
（一）賴(lài)氏比色法：＜實(shí)驗(yàn)＞P115
1.原理：
COOH COOH COOH COOH
（CH2）2 ＋ CH2 AST （CH2）2 ＋ CH2
C＝O HC-NH2 37℃ HC－NH2 C＝0
COOH COOH COOH COOH
酮戊二酸 天門(mén)冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸
COOH CH3
C＝0 脫羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C＝0 ＋ →丙酮酸－2.4－ ＝ ＋H2O
COOH 硝基苯腙
2.4－二硝基苯肼 酸性，草黃色，加堿，棕紅色
與標(biāo)準(zhǔn)濃度丙酮酸生成的苯腙比色（505nm）
2.正常參考值：8-28u
3.注意事項(xiàng)
（1）溶血標(biāo)本不能用于AST測(cè)定，因?yàn)镽BC中AST是血清10倍。
（2）M－AST、C－AST理化性質(zhì)，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反應(yīng)，是同I酶
（3）賴(lài)氏比色法簡(jiǎn)易性，相對(duì)準(zhǔn)確性，所以是普及的原因
（4）難以確定在酶反應(yīng)期內(nèi)，產(chǎn)物的生成與時(shí)間成正比。
草酰乙酸是AST競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，隨反應(yīng)進(jìn)程，產(chǎn)物，酶反應(yīng)不斷。
（5）顯色反應(yīng)及底物濃度問(wèn)題。
酮戊二酸也可與2.4－二硝基苯肼反應(yīng)，產(chǎn)生另一棕色苯腙，使AST測(cè)定假陽(yáng)性增高。
為了減少其干擾，波長(zhǎng)選在490-530nm，此時(shí)丙酮酸為－酮戊二酸2倍
2.4－二硝基苯肼在堿性溶液中也可呈色，使吸光度偽性增高。
（6）A、偶聯(lián)轉(zhuǎn)氨作用：
ALT
丙酮酸＋谷氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同時(shí)，使丙酮酸消耗，AST測(cè)定結(jié)果減低。
B、產(chǎn)物旁路
乳酸
LDH ↑NADH＋H+
丙酮酸
↑
α-酮戊二酸＋天門(mén)冬aa AST 草酰乙酸＋谷aa.
↓MDH＋NADH＋H+
所以受LDH、MDH干擾，使AST測(cè)定結(jié)果減低
（二）酶偶聯(lián)一些外連續(xù)監(jiān)測(cè)法：
1.原理：L-天門(mén)冬aa.＋α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸＋谷aa.
草酰乙酸＋NADH＋H+ MDH L-蘋(píng)果酸＋NAD+
340nm
吸光度下降值，計(jì)算AST活力
2.參考值：男＜40u/L 37℃
女＜35u/L 37℃
3.注意事項(xiàng)：
（1）采血后立即分離血清，避血溶血
血清與血塊不可長(zhǎng)時(shí)間設(shè)置在一起
（2）血清，室溫4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變
（3）抗凝劑血漿：
EDTA、2Na，肝素對(duì)AST無(wú)抑制作用
不能用草酸鹽抗凝劑，因?yàn)榭梢种艫ST活性
（4）AST濃度過(guò)高，稀釋重做。
（5）不存在偶聯(lián)轉(zhuǎn)氨作用和產(chǎn)物旁路問(wèn)題
（6）不存在 酮戊二酸干擾，可適當(dāng)提高底物濃度使反應(yīng)完全
（7）底物中存在谷氨酸脫氫酶（GLDH）
α-酮戊二酸＋NADH＋H+＋NH3 GLDH 谷aa.＋NAD+＋H2O
消耗NADH＋H+，使結(jié)果偽性增高。
（8）轎清中丙酮酸LDH
丙酮酸＋NADH＋H+ LDH 乳酸＋HAD+
消耗NDAH＋H+，使結(jié)果偏高
（9）在指示酶作用有，草酰乙酸可自動(dòng)脫羧生成丙酮酸，使結(jié)果偏低。應(yīng)加LDH，使之成為乳酸，從而更加準(zhǔn)
確反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作為指示酶
三、臨床意義：
1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗時(shí)6-12h↑，48h達(dá)高峰，3-5d恢復(fù)正常
3.急性肝炎，AST，ALT同時(shí)↑，可達(dá)正常值10-30倍，黃疸前期就已↑，有助于臨床早期診斷。
3.AST同I 酶：
<黃>血清酶測(cè)定時(shí)診斷心梗的意義：
心肌C、肝C出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性損害 M－AST C－AST↑
M－AST↑對(duì)肝病預(yù)后有一定診斷意義
心梗M－AST↑ 所以M－AST越↑，心梗并發(fā)心衰的發(fā)病率、死亡率越↑，尤其推測(cè)死亡率方面意義更大。
4.血清乳酸脫氫酶的測(cè)定： 原理 PH對(duì)其影響
LDH 糖酵解酶，氧化還原反應(yīng)
有五種同I酶LDH1－LDH5
一、LDH分布和特點(diǎn)：
廣泛分布，主要在腎，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述組織病變，血清中LDH。主要催化以下反應(yīng)：
L-乳酸＋NAD＋ 丙酮酸＋NADH＋H+
PH堿 正反應(yīng)（L-P）
PH中性 逆反應(yīng)（P-L）
二、方法學(xué)
（一）比色法：＜實(shí)驗(yàn)＞P122
1.原理：L-乳酸＋NAD＋ LDH 丙酮酸＋NADH＋H+
PH8.8
丙酮酸＋2.4－二硝基苯肼 → 丙酮酸－2.4－二硝基苯腙
酸 草黃色
加NaOH 棕紅色
顏色越深，酶活力越大
2.參考值：225-540u/dL
3.注意事項(xiàng)：產(chǎn)物生成量與反應(yīng)時(shí)間不成比例
（1）標(biāo)本嚴(yán)禁溶血 因?yàn)镽BC內(nèi)LDH活力是血清內(nèi)的100倍。
（2）LDH受重金屬鹽、EDTA、草酸鹽的抑制。最好用血清標(biāo)本
（3）血清標(biāo)本2-6 數(shù)天，室溫48h
（4）準(zhǔn)確性和重復(fù)性在酶學(xué)檢驗(yàn)中最差，因?yàn)槲宸N同I酶與底物結(jié)合能力不同，最適反應(yīng)條件不同，在病理
LDH組成差異大，所以很難找出LDH最適反應(yīng)條件。eg：心梗LDH1↑，肝病LDH5↑
（5）結(jié)果＞2500u/dL，將標(biāo)本稀釋重做。
（二）連續(xù)監(jiān)測(cè)法（酶法）：＜實(shí)驗(yàn)＞P120
1.原理：L-乳酸＋NAD＋ PH8.8-9.8 丙酮酸＋NADH＋H+
逆反應(yīng)比正反應(yīng)速度快2-3倍 所以反應(yīng)偏向左側(cè)，多用P-L
LDH
丙酸酸＋NADH＋H+乳酸＋NAD+
PH7.4
340nm處監(jiān)測(cè)，吸光度下降幅度與LDH成正比。
2.參考值：240-460u/L 37℃
3.注意事項(xiàng)：
（1）逆反應(yīng)優(yōu)點(diǎn)：
a.試劑用量少，所需NAD+，只是L-P所用NADH＋H+的3％，樣品少
b.單位時(shí)間內(nèi)吸光度變化大，逆反應(yīng)線性范圍較大，酶促反應(yīng)速率比正反應(yīng)快3倍，利于測(cè)定。 時(shí)間短
c.酶活力隨時(shí)間的線性關(guān)系較長(zhǎng)
（2）正反應(yīng)優(yōu)點(diǎn)：
a.NADH＋H+比NAD+穩(wěn)定，價(jià)格低，易得到純品。
底物L(fēng)-乳酸與逆反應(yīng)底物丙酮酸穩(wěn)定
b.L-乳酸對(duì)LDH的抑制低于丙酮酸對(duì)LDH的抑制
（3）連續(xù)監(jiān)測(cè)法可利用正、逆反應(yīng)，優(yōu)于比色法。
（4）金屬離子的存在可以降低NAD+穩(wěn)定性
試劑中可加入EDTA，使EDTA絡(luò)合金屬離子，增加NAD+穩(wěn)定。
（5）NAD+不穩(wěn)定，產(chǎn)生對(duì)LDH有抑制作用的物質(zhì)。在堿性液中比在酸性液中穩(wěn)定，在Tris緩沖液中比在磷酸
鹽緩沖液中穩(wěn)定。
（6）某些批號(hào)的NADH＋H+還有LDH的物質(zhì)，使用前檢查NADH＋H+質(zhì)量，NADH＋H+溶于Tris緩沖液，分別在
260nm和340nm測(cè)吸光度，應(yīng)＜2.3，若＞2.3，說(shuō)明含有在260nm處有吸收峰的雜質(zhì)，如NAD+、腺苷。
（8）標(biāo)本不能溶血
三、臨床意義：
1.LDH↑：急性心梗、骨骼肌損傷、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黃疸及惡性腫瘤。
2.心梗：12-24h，LDH↑，48-72h達(dá)高峰，1-2W后恢復(fù)正常
3.惡性腫瘤晚期LDH，惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑
4.慢性腎小球腎炎、SLE、糖尿病腎病等病人中，尿LDH可達(dá)正常人3-6倍，尿中含多種抑制LDH活性物質(zhì)，如尿素，
小分子肽類(lèi)。
低PH值也可抑制LDH活性。
5.尿毒癥患者LDH正常，透析后LDH↑，因?yàn)轶w內(nèi)尿素較高
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